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    科研服务

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    实时荧光定量PCR实验

    相关知识:

    聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)自诞生之日起就决定了它不仅是一种高敏感、高特异的检测核酸分子的定性方法,而且也是一个能对核酸分子进行精确定量的有力工具。1996年,美国Applied Biosystems公司推出了一种新定量试验技术——实时荧光定量PCR,它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。

    服务内容:

    技术原理:

    PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。

    样品准备条件:

    细胞样品:收集细胞后放入液氮中速冻保存或速冻24 h后转入-80 °C冰箱保存;收集细胞后,视细胞量,直接加入1-1.5 mL Trizol溶解裂解细胞,再转入-80 °C冰箱保存。

    组织样品:动物组织一般取材后立即放入液氮中速冻保存,液氮冻存24 h后可转入-80 °C冰箱保存;组织样品同样可以采用Trizol溶解裂解后放入-80 °C冰箱保存。特殊组织(植物等)建议采用新鲜组织即刻提取RNA,逆转合成cDNA后-20 °C保存备用。

    所有样品的处理和保存过程中,切忌反复冻融。

    样品运输条件:样品运输条件根据实验样品的处理条件,可以选择液氮或者干冰运输。

    服务内容:

             1)总RNA提取和质量检测;
             2)RNA逆转录为cDNA;
             3)免费设计引物/探针,进行qPCR检测,3个重复,内参免费,无需提供任何试剂;
             4)实验数据整理和分析。

    您只需提供:

    新鲜且足量的样品(组织不少于50 mg,细胞不少于106),或纯化好的符合实验要求的总RNA或cDNA(≥ 5 μg),检测的基因信息,相关文献等。

    我们提供:

    免费设计引物/探针,实验报告单,qRT-PCR原始数据,扩增曲线,溶解曲线,数据分析结果等。

    重要意义与应用:

    无论是对遗传疫病(如地中海贫血和血友病)、感染性疾病(如细菌、HBV、HPV、EBV、CMV、TB、支原体和衣原体等)以及肿瘤进行基因诊断,还是研究药物对基因表达水平的影响,或者监控药物和疗法的治疗效果,以及对食品及环境中菌群种类(如食品中污染的沙门氏菌)的检测,实时荧光定量PCR技术都可以发挥很大的作用。

     

    应用范畴:

    • 基因
    • 细胞
    • 微生物
    • 药物

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